K亚群禽白血病病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

根据GenBank数据库K亚群禽白血病病毒(Subgroup K avian leukosis virus,ALV-K)特异性抗原gp85的基因序列,设计一组ALV K特异性的引物和探针,并构建阳性重组质粒.在对反应体系进行优化的基础上,建立了ALV-K的实时荧光RT-PCR检测方法并进行了特异性试验、敏感性试验和重复性试验.结果显示,本方法能对ALV-K进行特异性扩增,而对A亚群、B亚群、J亚群、E亚群禽白血病毒和新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、禽网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽流感病毒(AIV)等禽病病原未见扩增.该方法最低能够检测到3.4×101拷贝数/μL的阳性质粒,灵敏度是RT-PCR的100倍.应用本方法对人工攻毒ALV-K的SPF鸡各脏器进行病毒定量分析,结果显示,在攻毒鸡体内心、肝、脾、肺、肾等脏器中均能检测到ALV-K,且肝、肾和脾中的病毒含量显著高于心和肺(P＜0.01).

关键词：禽白血病病毒(ALV-K)、K亚群、实时荧光RT-PCR、检测方法、应用

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;广东省自然科学基金;岗位科学家项目;岗位名称:生物安全与综合防控岗;广东省现代农业产业技术体系建设项目创新团队项目;团队名称:广东省家禽产业技术体系创新团队;珠海出入境检验检疫局科技项目

在线出版日期：2018-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：224-231