麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立

摘要：

建立麻疹病毒沪191株(MV-S191)反向遗传系统.提取MV-S191的RNA,RT-PCR分7段扩增出麻疹病毒反基因组cDNA,通过酶切、连接,拼接出MV-S191全长反基因组,并分别在其3”端和5”端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)和锤头核酸酶序列(HamRZ),克隆到pT7-MCS载体,获得pT7MVs191.在MV-S191的P-M基因间区域插入绿色荧光蛋白(GFP),获得pT7MVs191-ATU-GFP,同时构建表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的3个辅助质粒.将pT7MVs191、pT7MVs191-ATU-GFP分别与辅助质粒通过脂质体介导共转染BSRT7细胞,热休克3h.转染3d后,取上清,感染Vero-SLAM细胞.经RT-PCR、显微镜检测绿色荧光蛋白表达及合胞体形成,在该系统中成功拯救到两种有感染活性的病毒.成功建立了MV-S191的反向遗传系统,为以麻疹病毒为载体进行新疫苗的研发奠定了基础.

关键词：MV-S191、反向遗传、T7 RNA聚合酶、绿色荧光蛋白(GFP)

所属期刊栏目：33

分类号：R373.1+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：565-571