狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备
为表达狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基质蛋白(M)蛋白,进而制备多克隆抗体.本研究以狂犬病病毒BD06株RNA为模版,通过RT PCR扩增M蛋白基因全序列,将其插入质粒pFastbac Ⅰ中,获取的重组质粒pFastbac Ⅰ-M,经酶切鉴定后,转化到DH10Bac E.coli感受态中,以获取重组穿梭质粒Bacmid-M.用lipofectamine2000介导Bacmid-M转染Sf9细胞获取重组杆状病毒AcMNPV-M.用抗His标签的单体、犬抗RV阳性血清及兔抗RV阳性血清通过Western-Blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性.用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,用Western-Blot和FAVN试验鉴定多克隆抗体的反应原性及其病毒中和效价.结果表明:(1)利用杆状病毒表达系统成功的表达了大小约为25 kD的重组M蛋白;(2)重组M蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;(3)制备的多克隆抗体与狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能发生特异性反应,但其无病毒中和能力.本研究完成了重组M蛋白的表达、纯化并制备了其多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了物质基础.
狂犬病病毒、基质蛋白、杆状病毒、表达、纯化、多克隆抗体
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R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金31472176
2016-08-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
472-477
