中东呼吸综合征冠状病毒多重荧光定量RT-PCR检测技术的建立

摘要：

建立中东呼吸系统综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染的筛查与诊断应用的核酸检测方法.本研究建立了基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重的三种荧光定量RT-PCR检测技术方法,分别与前期建立的单重荧光定量RT-PCR(upE或N2)检测方法做了比较,并且采用MERS-CoV病毒毒株、上海提供的口岸发烧病人样本以及由首例中国MERS-CoV韩国地区输入病例的咽拭子样品和全血的样品做了临床验证.结果显示:采用MERS-CoV病毒毒株作为模板,三种新建立的多重检测方法与单重荧光定量RT-PCR检测方法最低检测限均能达到10 PFU/mL,且与其他常见呼吸道病毒的阳性样本均无交叉反应,特异性良好.对临床样品的验证中,上海病人咽拭子样本均为阴性,而中国首例MERS输入病例的急性期咽拭子样品均为阳性,而全血样的检测结果显示N2靶标有较高检出率,明显优于基于upE单一靶标.本研究所建立的基于MERS-CoV三个分子靶标(upE,ORF1b,N2)的双重以及三重荧光定量RT-PCR检测技术方法用于MERS-CoV感染的实验室诊断,具有较高灵敏度与特异性及适用性.

关键词：中东呼吸系统综合征、冠状病毒、荧光定量RT-PCR、多重、检测

所属期刊栏目：32

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：传染病重大专项2014ZX10004-001,201310004-101,2013ZX10004601

在线出版日期：2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：349-354