JSRV-Env诱导转染TC-1、TC-1-Hyal2细胞后对AKT和ERK表达的影响
为了探索JSRV与其受体相互作用后靶细胞的致瘤机制,本研究应用JSRV Env真核表达质粒分别诱导转染小鼠肺上皮细胞(TC 1)和稳定表达绵羊Hyal-2的小鼠肺上皮细胞(TC-1-Hyal2),而后检测细胞信号转导通路上AKT(丝氨酸/苏氨酸激酶)和ERK(细胞外信号调节激酶)在mRNA及蛋白水平上的表达变化,并分析绵羊Hyal-2在JSRV Env诱导TC-1细胞转化过程中的作用.首先体外培养TC-1和TC-1-Hyal2两种细胞,并分别设立pEGFP-C1-env转染组、pEGFP-C1转染组及未转染质粒组.通过实时荧光定量PCR和Western blot方法检测两关键酶在不同水平上的表达变化.qPCR结果显示:与未转染质粒细胞组比较,转染pEGFP-C1-env的两细胞组中AKT和ERK1/2mRNA表达均显著升高(P＜0.05).Western blot结果显示:与未转染质粒细胞组比较,转染pEGFP-C1-env两细胞组中p-Akt(S473)蛋白表达量显著升高(P＜o.05);且p Akt(T308)和p-Erk1/2蛋白在转染pEGFP-C1-env的TC-1细胞组中表达量也均呈显著升高变化趋势(P＜0.05),而这两种蛋白在相同处理的TC-1Hyal2细胞组中表达量均呈极显著升高(P＜0.01).此外,转染pEGFP-C1空载体的各细胞组与未转染质粒细胞组相比较AKT和ERK mRNA和蛋白含量差异均小显著(P＞0.05).JSRV Env在诱导上述细胞系转化过程中,Ras-Raf-MAPK和PI3K-Akt两条细胞信号转导通路被激活;实验检测得知,转染pEGFP-C1-env的两细胞组中AKT、ERK表达量均升高;相比之下,在TC-1-Hyal2细胞组中其表达量升高更显著.研究结果推测绵羊Hyal-2在JSRV Env诱导TC-1细胞转化过程中起促进作用.
JSRV-Env真核表达质粒、TC-1细胞、TC-1-Hyal2细胞、AKT、ERK
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S852.65(动物医学（兽医学）)
国家自然科学基金项目批准号:31260593,项目名称:JSRV囊膜假病毒诱导肺上皮细胞癌变的信号转导机制研究.
2016-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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