嵌合中国河北株包膜蛋白基因的HCV细胞培养模型的传代分析

摘要：

建立稳定的嵌合中国河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)细胞培养体系,进行传代特性分析.本研究经体外转录获得嵌合中国河北株包膜蛋白基因的丙型肝炎病毒(HCV)全长RNA,脂质体法转染Huh7.5-CD81细胞,连续传代培养,进行Real Time RT-PCR、间接免疫荧光、Western blot、再感染试验与感染滴度检测及序列分析.结果表明:嵌合重组HCV RNA转染Huh7.5-CD81细胞后可产生感染性的病毒颗粒(HCVcc);传代过程中,Western blot可检测细胞内HCV蛋白的表达;IFA检测阳性细胞数逐渐增多,41d升至高峰,达80％～90％;RealTime RT-PCR检测传代细胞上清中HCV RNA拷贝数在104～107拷贝/mL;再感染实验嵌合HCVcc最高感染滴度为104 ffu/mL.序列分析显示在传代后期嵌合的HCV包膜基因发生了适应性突变,导致6处氨基酸改变.结论嵌合中国河北株1b亚型包膜蛋白基因的HCV细胞培养体系可以产生具有感染性的嵌合HCV病毒颗粒,传代后感染性增强并且嵌合的HCV包膜基因发生了适应性突变.

关键词：丙型肝炎病毒、嵌合、包膜蛋白、细胞培养

所属期刊栏目：31

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家科技重大专项;国家科技重大专项;内蒙古医科大学科技百万项目

在线出版日期：2015-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：647-652