环介导逆转录等温扩增技术检测中东呼吸综合征冠状病毒基因
建立了基于浊度仪和羟基萘酚蓝(Hydroxy naphthol blue,HNB)颜色变化的简单、快速和灵敏的环介导逆转录等温扩增技术(RT-LAMP)检测方法,应用于中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)的检测.针对MERS CoV的核衣壳蛋白基因(Nucleocapsid,N)设计6条特异引物,在等温条件下(63℃)进行60 min扩增反应.通过实时浊度仪记录扩增曲线和扩增前在反应体系中加入HNB观察颜色变化两种方式进行检测结果判定.本文对不同人类冠状病毒及常见呼吸道病毒进行了特异性验证,对梯度稀释的体外转录MERS-CoV全N基因RNA进行了定量和检测限分析,同时与已发表的实时荧光定量PCR (rRT-PCR)进行比较.结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,对于每反应管103至106的拷贝数RNA,出峰时间与每反应管N基因RNA拷贝数对数值有稳定的线性关系.基于浊度仪和颜色判定的RT-LAMP检测方法检测限分别为500拷贝和1 000拷贝.因此,该方法有望应用于MERS-CoV感染的快速筛选,具有在基层医疗卫生机构和现场推广和应用的潜力.
环介导逆转录等温扩增、中东呼吸综合征冠状病毒
31
R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家传染病防治科技重大专项2013ZX10004-001,2012ZX10004-215,2013ZX10004-202;2013ZX10004804-007
2015-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
269-275
