发热伴血小板减少综合征病毒灭活病毒的纯化及免疫原性初步研究
为了解纯化后灭活发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的免疫原性,本研究通过超滤浓缩和分子筛层析相结合的方法对灭活的SFTSV进行纯化,采用Western blot和SDS-PAGE对灭活病毒的纯化样品进行分析和鉴定,采用双抗夹心ELISA方法对其中糖蛋白(Glyeoprotein,GP)和核蛋白(Nucleoprotein,NP)的抗原含量进行检测.浓缩纯化的SFTSV火活病毒,经电镜观察并通过BCA法测定其总蛋白浓度.然后,将纯化的灭活SFTSV按两种不同的免疫程序免疫新两兰兔,评价免疫原性和比较免疫效果.结果显示,SFTSV灭活并超滤浓缩后,分子筛层析可观察到两个洗脱峰,其中之一为灭活病毒颗粒,SDS-PAGE、Western blot和ELISA法分析均可检测到GP和NP抗原,而另一洗脱峰主要成分则为NP.浓缩后的纯化病毒纯度达90％以上,总蛋白浓度约为1.1mg/mL,且具有典型的布尼亚病毒电镜形态.纯化的SFTSV灭活病毒免疫实验动物后,可在血清中检出高滴度病毒特异性IgG和中和抗体,但抗体滴度受免疫程序的影响,0d、14d和28d天三针程序免疫动物的效果明显优于0d、7d和28d免疫程序组.本研究显示了灭活SFTSV培养液中除完整病毒颗粒外,还含有大量游离的NP,经分子筛层析纯化可获得高纯度灭活病毒,同时明确了纯化的SFTSV灭活病毒具有良好的免疫原性,可诱导产生高滴度中和抗体和病毒特异IgG抗体,可为灭活病毒疫苗的进一步研究提供重要的线索.
发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)、灭活病毒、分子筛层析、纯化、免疫原性
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R373.3+2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
“重大新药创制”科技重大专项:发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒灭活疫苗的研制2013ZX09102029
2015-07-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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