基于滚环扩增的鸭乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA检测方法的建立

摘要：

滚环扩增(RCA)是新近发展起来的一种能特异性扩增环形DNA的实验技术,自2008年以来被广泛用于HBV基因全长扩增及共价闭合环状DNA (cccDNA)耐药突变分析等研究.为了便于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA的分析,本研究建立了基于RCA的DHBV cccDNA的检测方法.通过针对DHBV高度保守序列设计的4对RCA硫化修饰引物,以血清DHBV DNA为阴性对照,从肝组织DHBV DNA标本中扩增得到DHBV cccDNA.然后用跨缺口引物扩增RCA产物测序替代限制性内切酶切分析进行DHBV cccDNA鉴定.应用该方法检测39份携带DHBV麻鸭肝组织与血清标本结果显示:全部肝组织标本均检出DHBV cccDNA,而全部血清标本则均无DHBV cccDNA检出,表明本研究建立的基于RCA的DHBV cccDNA检测法具有良好的特异性和灵敏性.该方法的建立为应用鸭乙型肝炎病毒动物模型研究cccDNA在病毒致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效奠定了实验基础.

关键词：滚环扩增、鸭乙型肝炎病毒、共价闭合环状DNA

所属期刊栏目：30

分类号：R373.2+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：广西自然科学基金项目2012GXNSFAA053146资助

在线出版日期：2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：382-386