一株小鼠诺如病毒的分离和鉴定及全基因组序列分析
小鼠诺如病毒(Murine norovirus,MNV)属于杯状病毒科诺如病毒属成员,是2003年新发现的感染实验小鼠的病毒,也是目前已知的小鼠病毒中感染率最高的一种病毒.本研究利用RAW264.7细胞从MNV感染小鼠的盲肠内容物中进行病毒分离,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法、病毒空斑试验、TCID50试验、电镜观察、间接免疫荧光试验和测序分析等方法对分离到的病毒进行鉴定,结果显示RAW264.7细胞接毒24～48h后出现明显的细胞病变,表现为细胞圆缩、变亮、聚集,最后大部分细胞死亡脱落.分离株在RAW264.7细胞上传代至第2～3代时可出现稳定的细胞病变.经病毒空斑试验获得一株纯化病毒,病毒滴度TCID50为10525/0.1mL.电镜观察可见明显的病毒颗粒,颗粒呈球形,无囊膜,直径约30～35nm.分离株经鉴定后命名为MNV Guangzhou/K162/09/CHN.采用RT-PCR技术分段扩增基因组开放阅读框(ORF),同时应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增基因组的3'-UTR和5'-UTR,分别对扩增片段进行克隆和测序,经拼接后获得分离株全基因组序列.结果显示分离株基因组序列全长7 380个核苷酸(GenBank登录号:HQ317203),将分离株全基因组序列与GenBank登录的国外参考毒株进行同源性比较,结果表明该毒株与其他MNV分离株核苷酸同源性为87.4％～89.7％.基于VP1蛋白核苷酸序列绘制MNV毒株系统发生进化树,结果表明该分离株与来自日本(S7-P2和S7-PP3)、美国(CR3和CR18)、韩国(K4)和德国(Berlin/04/06/DE和Berlin/05/06/DE)的毒株进化距离较近,同属一个进化分支.本研究是国内首次对MNV病毒进行分离鉴定和全基因组序列分析的报道.
小鼠诺如病毒(MNV)、病毒分离和鉴定、遗传进化分析
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Q95-33;S865.1+3(动物学)
广东省科技计划;广东省科技计划;广东省省部产学研结合项目
2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
359-368
