基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法研究

摘要：

为了便于新发或罕见病毒性传染病的筛查检测,本研究利用多重置换扩增技术,以负链RNA病毒一发热伴血小板减少综合征病毒和正链RNA病毒一登革病毒为模拟样本探索临床样本中RNA病毒基因组非特异性扩增方法.研究中通过梯度稀释的RNA病毒模拟样本中可能存在的不同丰度的病原体,样本核酸依次加工成单链cDNA、双链cDNA、T4 DNA连接酶处理后的双链cDNA以及添加外源辅助RNA后合成并连接的双链cDNA形式,然后进行Phi29 DNA聚合酶等温扩增,使用荧光定量PCR方法比较各种方法对RNA病毒核酸扩增的影响.结果显示,对于不同类型的RNA病毒模拟标本,多重置换扩增对于单链及双链cDNA的扩增效果有限,而双链cDNA经DNA连接酶处理后的扩增能达到6×103倍；在cDNA合成过程中加入外源辅助RNA,模拟样本中病毒基因组的扩增可达2×105倍,尤其是对含有低丰度病原体的模拟样本扩增效果的改善更为明显.本研究摸索建立了基于多重置换扩增技术的RNA病毒基因组扩增方法,能够对样本中低丰度RNA病毒基因组实现有效扩增,可满足开展多种病原体筛查检测的需求.

关键词：多重置换扩增、Phi29 DNA聚合酶、RNA病毒

所属期刊栏目：29

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：传染病防治重大专项一重大传染病应急处置检测平台2011ZX10004-001,2013ZX10004-001

在线出版日期：2013-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：432-436