猪盖他病毒衣壳蛋白的原核表达、纯化和多克隆抗体的制备

摘要：

原核表达猪盖他病毒(Getah virus)衣壳蛋白(Cap)并制备多克隆抗体.设计一对特异性引物,从含有Cap基因的pT Cap质粒中扩增全长Cap基因,克隆至携带有His标签的原核表达载体pCold Ⅰ中,通过PCR、酶切鉴定和序列测定后,重组质粒pCold-Cap转化大肠杆菌Rosetta 2,IPTG诱导后SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白；蛋白经镍柱纯化后切胶免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体.实验表明:经终浓度0.1 mmol/L IPTG 15℃诱导24 h后,Cap基因在Rosetta 2中获得高效表达,表达量占菌体蛋白的40.2％,SDS-PAGE显示融合蛋白相对分子质量为32.3 kD.Western blot显示制备的鼠源抗血清可以与融合蛋白发生反应,有明显的特异性条带.猪盖他病毒衣壳蛋白原核表达成功,制备的多抗可以识别Cap蛋白.

关键词：猪盖他病毒、衣壳蛋白、原核表达、多克隆抗体

所属期刊栏目：29

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科技计划项目2009IK012

在线出版日期：2013-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：371-375