环介导间接PCR鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立

摘要：

建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)环介导间接PCR检测方法,用于该病毒的感染检测和高致病性毒株与低致病性毒株的鉴别诊断.根据GenBank数据库中PRRSV中国流行株ORF7和ORFla基因序列的保守性,设计2对特异性探针,分别标记于大豆Lectin基因两端,作为报告基因,经过一步链置换反应后,采用反向PCR扩增报告基因,建立PRRSV环介导间接PCR检测方法,该方法扩增HP-PRRSV可得大小为193bp和355bp的特异片段,扩增LP-PRRSV可得大小为193bp和442bp的特异片段.试验结果表明,该方法能成功鉴别HP/LP-PRRSV,可检测出5.6 TCID50/mL LP-PRRSV和18 TCID50/mL HP-PRRSV的病毒RNA,HP/LP-PRRSV混合感染不影响检测灵敏度,与CSFV、PPV、PRV、PCV2、ETEC和Haemophilus parasui等常见猪源性病原的检测无明显交叉反应；对20份临床样本进行比较检测,环介导间接PCR检测出14份PRRSV阳性样本,其中4份LP-PRRSV、9份HP-PRRSV和1份LP/HP-PRRSV,与常规PCR检测结果一致.环介导间接PCR是一种简便快速、灵敏、特异的病原学诊断工具,适合PRRSV感染的快速检测和HP/LP-PRRSV鉴别诊断,尤其适合HP/LP-PRRSV混合感染的鉴别.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、环介导间接PCR、报告基因

所属期刊栏目：29

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省重点科技攻关项目092102110073

在线出版日期：2013-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：364-370