鸡传染性法氏囊病毒实时qRT-PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

根据高效培养鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)时对病毒滴度检测的需要,本文针对IBDV VP4基因的保守序列设计并合成了一对引物,以所构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测IBDV核酸载量的SYBR Green I荧光定量实时RT-PCR(qRT-PCR)方法,结果表明,其Ct值与标准品模板在4.03×101～109拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,对IBDV核酸的最低检出量为40拷贝/μL,灵敏度是常规RT-PCR检测方法的1 000倍；该方法不与其它禽源病毒发生交叉反应,批内变异系数小于0.5％.应用本方法对DF-1细胞中IBDV的增殖滴度进行了测定,并与经典的TCID50测定方法进行了比较.结果显示两种方法测定的IBDV在微载体悬浮培养和方瓶静态培养条件下DF-1细胞上的增殖曲线都具有一定的平行关系,且qRT-PCR方法比TCID50方法更加快速和敏感,更适合于对IBDV增殖滴度的实时快速测定.

关键词：鸡传染性法氏囊病毒、DF-1细胞、QRT-PCR、TCID50、增殖滴度

所属期刊栏目：28

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：农业科技成果转化资金项目;国家自然科学基金

在线出版日期：2012-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：424-430