共表达甲型流感病毒M1和HA抗原的重组杆状病毒的构建

摘要：

为构建同时表达流感病毒M1和HA抗原的重组杆状病毒,采用PCR扩增流感病毒A/PR/8/34株的M1基因和去除信号肽的HA基因,将两基因克隆到杆状病毒转座载体pFastBac Dual的两个启动子下游的多克隆位点,筛选出阳性重组转座载体pFastBac Dual-M1-HA.将其转化含有杆状病毒穿梭载体(Bacmid)的DH10Bac感受态细胞,通过抗生素、蓝白斑筛选和PCR鉴定获得重组杆状病毒穿梭载体rBacmid-M1-HA,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rBac-M1-HA.提取重组病毒基因组,通过PCR鉴定外源基因插入成功.间接免疫荧光和Western-blot检测表明,该重组杆状病毒在Sf9昆虫细胞中成功地表达了M1和HA.应用杆状病毒/昆虫细胞系统成功共表达流感病毒M1和HA抗原,为研究流感病毒VLP的形成机制和开发新型流感疫苗奠定了基础.

关键词：流感病毒、基质蛋白1、血凝素、共表达、杆状病毒表达系统

所属期刊栏目：28

分类号：R373.1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治"科技重大专项2009ZX10004-710

在线出版日期：2012-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：231-236