鹅圆环病毒感染性克隆的构建及其转染试验

摘要：

设计带BamHⅠ酶切标记位点的引物,PCR扩增鹅圆环病毒(Goose circovirus,GoCV)全长基因组,将2个基因组顺式连接插入到pGEM-T Easy载体中,获得GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆质粒pGEMT2GoCV.EcoR Ⅰ酶切线性化pGEMT-2GoCV,与脂质体混合转染GoCV阴性鹅胚和雏鹅,常规PCR检测发现GoCV在转染鹅体内增殖,鹅胚转染组于孵出第2周和第4周检出血清阳性,且其中一个个体于4周龄扑杀时检出法氏囊阳性,雏鹅转染组于转染后2周检出血清阳性.试验进一步对扩增片段进行了BamH Ⅰ标记位点的检测,并应用GoCV实时荧光定量PCR方法对转染阳性样品进行了定量,结果显示阳性法氏囊组织中病毒含量为1.57×106拷贝/mg,阳性血清含病毒拷贝数在3.52×104～5.92×105拷贝/μL.综上,本试验构建的GoCV全长基因组头尾串联二聚体感染性克隆DNA可以转染鹅胚和雏鹅并增殖出带标记的GoCV克隆.

关键词：鹅圆环病毒、全长基因组头尾串联二聚体、感染性克隆、转染

所属期刊栏目：28

分类号：R373.2;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;浙江省重点科技计划;宁波市重大科技计划

在线出版日期：2012-03-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：29-34