携带GFP绿色荧光标记的重组BAC-HSV-1HF株的构建及其子代病毒的特性研究
本研究旨在构建由细菌人工染色体(Bacteria artificial chromosome,BAC)携带的单纯疱疹I型病毒质粒及携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的重组型BAC-HSV-1感染性子代病毒.构建了携带HSV-1同源臂的质粒C223-UL43左臂-UL47右臂.将该质粒线性化后与HSV-1基因组共转染至Vero细胞,通过真核细胞内同源重组产生了含有GFP报告基因的BAC-HSV-1重组病毒,噬斑纯化筛选出阳性重组病毒,并再次感染Vero细胞,Hirt法提取BAC-HSV-1环形基因组并将其电穿孔入DH10B感受态细胞,由PCR和酶切法鉴定BAC-HSV-1质粒.为研究BAC-HSV-1子代病毒的生物学特性,将实验组和对照组细胞分别给予BAC-HSV-1质粒和HSV-1基因组DNA,收取病变细胞的上清液,以MOI=0.1再次感染Vero细胞,半数组织培养感染剂量(50%tis-sue culture infective dose,TCID50)法测定两组的病毒滴度.PCR和酶切法分别鉴定BAC-HSV-1,结果示BAC-HSV-1构建成功.TCID50法测定实验组和对照组病毒滴度,经统计学分析两组病毒滴度间差异无统计学意义(P＞0.05).本研究成功地构建了真核细胞和原核细胞间穿梭的HSV-1-BAC重组病毒/质粒.
细菌人工染色体、单纯疱疹病毒Ⅰ型、同源重组
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R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
河南省卫生厅医学科技攻关项目200801003;河南省卫生厅医学科技攻关项目200702005;河南省教育厅河南省基础与前沿技术研究计划项目082300450270;河南省教育厅自然科学研究计划项目2009A320045
2011-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
238-243
