甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化

摘要：

为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPWt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性.限制性酶切反应与测序表明.三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示.三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T＝25℃,t＝10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western bIot检测显示.纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合.这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性.

关键词：甲型流感病毒、核蛋白、原核系统、密码子优化、蛋白质表达

所属期刊栏目：27

分类号：R373.1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家863计划资助2006AA02A203

在线出版日期：2011-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：50-57