HIV包膜蛋白Gp120在果蝇Schneider 2细胞内的表达纯化及初步性质鉴定

摘要：

构建pMT/BiP/V5-His A-HIV gp120真核表达载体,通过稳定转染获得稳定表达gp120蛋白的果蝇Schneider 2(S2)细胞系,并对gp120蛋白进行大量表达和纯化.应用聚合酶链式反应技术从重组载体PVR101 2-gp120中扩增出中国流行株CRF07-BC gp120全长基因后,将其插入载体pMT/BiP/V5-His A.应用脂质体转染技术将真核表达载体和抗性筛选质粒共转染果蝇S2细胞,通过杀稻瘟菌素反复筛选,建立稳定高表达gp120蛋白的果蝇S2细胞系,并通过镍柱亲和层析和分子筛法纯化目的蛋白.用SDS-PAGE对重组蛋白的分子量和纯度进行分析,并通过Western blot和酶联免疫吸附技术(ELISA)对其进行鉴定.成功构建了gp120真核表达载体并获得了稳定转染该蛋白的果蝇S2细胞系,成功的表达了具有良好抗体反应性的gp120全长蛋白.此结果为深入研究HIV包膜蛋白gp120的生物学特性及进行HIV疫苗的研究提供了良好的物质基础.

关键词：HIV-1包膜蛋白gp120、真核表达载体、转染、S2细胞系、酶联免疫吸附技术

所属期刊栏目：26

分类号：Q51(蛋白质)

资助基金：国家传染病防治科技重大专项十一五2008ZX10001-010

在线出版日期：2011-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：460-464