靶向HIV-1 vif的高效人工miRNA的构建及慢病毒介导的体外抗病毒研究

摘要：

RNAi在HIV-1的治疗研究中得到了广泛的应用,构建高效并且安全的RNAi抗病毒元件是开展相关研究的基础.vif37是以前的研究中筛选获得的靶向HIV-1 vif的高抑制效率兼具保守性的RNAi靶点.miRNA在抑制效率和启动子的选择上比常用的shRNA具有优势.本研究探索以人工miRNA结构引发vif37靶点对应的RNAi.本研究以天然的miR-155前体为骨架,采用步移的方式设计了3个靶向vif37的人工miRNA,以RNA聚合酶Ⅱ类启动子指导表达.miRNA表达质粒和HIV-1的感染性克隆pNL4-3共转染的结果显示,3个人工miRNA中只有miR-vif37H具有抑制效果,效率与shRNA-vif37相当.与携带靶序列的荧光索酶报告质粒共转染实验证明miR-vif37H具有良好的抑制特异性.用表达miR-vif37H的重组慢病毒转导HIV-1的敏感细胞MT-4,克隆化后获得稳定表达miR-vif37H的细胞株MT-4-miR37H,该细胞可以有效抑制HIV-1的体外复制.实时RT-PCR检测结果显示,与shRNA-vif37相比,miR-vif37H的表达水平明显下降,安全性更好.进一步的实时RT-PCR检测结果还显示,miR-vif37H在细胞内的稳定表达不会影响内源代表性miRNA(miR-181和miR-16)的加工以及干扰素应答相关基因Stat1的mRNA水平.miR-vif37H是一个特异的高效RNAi元件,为vif37靶点的进一步应用研究奠定了基础.

关键词：RNA干扰、HIV-1、vif、人工miRNA

所属期刊栏目：26

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：福建省自然科学基金C0710041

在线出版日期：2010-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：8-15