用分泌型萤光素酶报告系统比较TTR启动子与CMV启动子的体内外表达特性

摘要：

Gluc(Gaussia Luciferase)是一种高灵敏度分泌型萤光素酶.本研究利用Gluc的易分泌、高灵敏性和检测方法简单快速的特点,初步比较了TTR启动子(P_(TTR))与CMV启动子(P_(CMV))的体内外表达特性.首先构建了两种启动子-报告基因表达质粒pAAV2-neo-TTR-Gluc和pAAV2-neo-CMV-Gluc.用脂质体转染法将它们分别转染至两株肝细胞源的细胞株Huh7与HepG2以及两株非肝细胞源细胞株HEK293与HeLaS3.在转染后不同时间点取细胞培养上清液检测Gluc的表达.此外采用水动力注射法,将这两种质粒分别以注射剂量0.1μg、1μg和10μg/只经尾静脉注射至BALB/c小鼠体内,注射后2h开始在不同时间点上经尾静脉采集全血(2.5μl/次)并测定血液中的Gluc水平.细胞实验结果显示,P_(CMV)介导的Gluc表达都明显高于P_(TTR);然而,在HEK293和HeLaS3细胞中P_(CMV)比P_(TTR)的表达水平高50～300倍,而在Huh7和HepG2中仅高10倍以内,提示P_(TTR)具有相对的肝细胞特异性.在小鼠实验中,P_(CMV)介导的Gluc表达在各剂量组中也明显高于P_(TTR),然而它们表达水平变化特征明显不同:P_(CMV)介导的Gluc表达在质粒注射后约10h达到最大值,此后迅速下降;而P_(TTR)介导的Gluc表达在质粒注射后约48h达到峰值,随后缓慢下降.上述实验结果提示,P_(TTR)虽然在表达强度方面不及P_(CMV),但其介导的表达水平维持长时间,下降较缓慢,比较适于目的基因在肝脏内的较长时间表达.

关键词：分泌型萤光素酶、水动力注射、启动子、转甲状腺素蛋白、巨细胞病毒

所属期刊栏目：25

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划（973计划）2004CB518806

在线出版日期：2010-02-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：424-429