化学合成小干扰RNA分子高效抑制草鱼呼肠孤病毒复制

摘要：

采用化学合成法分别合成靶向草鱼呼肠孤病毒(GCRV)RNA基因组节段L2片段上的RNA聚合酶基因(RdRp)和S4片段上的外衣壳蛋白基因(OCP)的小干扰RNA分子siRNA-RdRp1 286、siRNA-RdRp1 441和siRNA-OCP117,脂质体转染法转染草鱼肾脏组织细胞系CIK.转染6 h后用草鱼呼肠孤病毒感染细胞,48 h后收集感染细胞的培养液,微量培养法测定病毒lgTCID50/0.1mL值.以细胞管家基因β-actin mRNA水平为参照,RT-PCR法检测呼肠孤病毒siRNAs靶基因的mRNA水平.病毒滴度测定结果表明:转染siRNA-RdRpl 286、siRNA-RdRpl 441和siRNA-OCP117三种siRNAs的病毒滴度lgTCID50/0.1 mL分别为4.41±0.16、3.83±0.44和1.94±0.42,极显著低于阳性感染对照组的病毒滴度(7.92±0.52,P<0.01),转染siRNA阴性对照组的病毒滴度无明显变化(7.50±0.17,P>0.05).RT-PCR检测结果显示:与阳性感染对照组比较,转染siRNA-RdRp1286、siRNA-RdRpl 441和siRNA-OCP117后的CIK细胞中GCRV mRNA水平显著下降,抑制率分别为82.08±2.15%、89.19±1.14%和92.62±0.1 7%,而转染阴性对照组对GCRV mRNA水平没有显著的影响(P>0.05).

关键词：草鱼呼肠孤病毒、RNA干扰、复制、抑制

所属期刊栏目：25

分类号：S941.41+1(水产保护学)

资助基金："十一五"国家科技支撑计划"草鱼抗病育种技术研究"2006BAD01A12014;农业公益性行业科研专项"主要淡水鱼出血病病原学与新技术疫苗研制"200803013

在线出版日期：2009-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：388-394