人Boca病毒外壳蛋白VP2在杆状病毒中的表达及病毒样颗粒的构建
为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒(HBoV)主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本(BJ3722)的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体(pFastBac1),通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转染昆虫细胞Sf9.收获重组病毒及其昆虫细胞培养物,经SDS-PAGE并应用兔抗HBov VP2高价免疫血清进行Western blot,以检测所表达的VP2蛋白,昆虫细胞经重组病毒感染后7～10d细胞完全裂解时,收获培养上清(VLPs-A),或在感染后4～5d细胞裂解前收获细胞并将其裂解(VLPs-B),经两次40%的蔗糖垫超速离心,所得的样品经Western blot和间接免疫荧光方法(IFA)检测,以确定VLPs的组分,然后应用免疫电镜观察病毒样颗粒的形态结构.通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测,均可检测到分子量约61kD的目的蛋白;通过IFA在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中检测到特异性荧光,表明HBoV VP2蛋白得到了表达并具有抗原特异性.纯化后的样品在电镜下可见类似于天然细小病毒B19的直径20nm左右的具有空壳结构的球形颗粒.本研究成功构建了HBoV VP2重组杆状病毒,得到了具有抗原特异性的HBoV VP2蛋白表达并形成了HBoV的VLPs.
人Boca病毒、外壳蛋白VP2、重组杆状病毒、病毒样颗粒(VLPs)
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R373.1;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家自然科学基金30872153;北京市科技新星2006A63
2009-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
333-338
