猪水泡病病毒HK'1/70株基因组全长cDNA的构建及其序列测定

摘要：

从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDV HK'1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3'PCR片段和5'PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体.利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5'PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3'PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK'1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定.结果表明,HK'1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5'NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3'NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾.在HK'1/70株全长cDNA序列的5'端引入了T7启动子序列,在poly A 3'端引入了Psp1406Ⅰ识别序列.通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK'1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上.HK'1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础.

关键词：猪水泡病病毒、RACE、全长cDNA克隆、分子克隆

所属期刊栏目：23

分类号：S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2005CB523201;国家高技术研究发展计划863计划2003AA241110

在线出版日期：2007-03-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：51-56