SARS病毒受体ACE2的克隆、原核表达及其功能区鉴定

摘要：

ACE2(angiotensin-converting enzyme 2, ACE2)是SARS冠状病毒(severe acute respiratory syndrome associated coronavirus, SARS-CoV)的主要受体.此研究旨在鉴定ACE2的SARS-CoV受体功能区,为进一步阐明SARS-CoV与细胞间的相互作用机制及研制抗病毒药物等提供理论依据.利用RT-PCR从Vero-E6细胞的mRNA中分两段扩增ACE2基因,其中N端片段ACE2A1-367(102～1 210nt)不包括ACE2的酶活性位点(1 223～1 237nt, 或374～378aa),而C端片段ACE2B335-805(1 101～2 524nt)包括ACE2的酶活性位点.扩增片段克隆入pMD-18T,并进行测序鉴定.进一步构建与GST基因融合表达的原核表达质粒pGEX-ACE2A与pGEX-ACE2B,IPTG诱导表达.表达的融合蛋白分子量为65kD和77kD,主要以包涵体形式存在.Western blot证实表达产物具有免疫学活性.将纯化的包涵体蛋白质复性后进行Western blot分析,证实pGEX-ACE2A表达的蛋白(～65kD)能与SARS-CoV S1蛋白特异结合,而pGEX- ACE2B表达的蛋白(～77kD)不能与S1蛋白结合.结果表明,ACE2的受体活性与酶活性位点无关,受体功能区在ACE2 N端367个氨基酸内.

关键词：SARS-CoV、ACE2、受体、克隆、表达、功能区

所属期刊栏目：22

分类号：R373;Q78(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重点基础研究发展基金973计划2003CB514122

在线出版日期：2006-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：118-122