一种新的PrP无细胞构象转化系统的建立

摘要：

PrP细胞外构象转化系统已经被一些实验室用于朊病毒的研究,但在反应体系中往往需要使用放射性同位素.为了建立一种安全方便的PrP无细胞构象转化系统用于TSE发病机制的研究,通过PCR方法获得仓鼠PrP(HaPrP)全长基因,克隆至原核表达载体pQE30,在大肠杆菌中表达并纯化出分子量为27kD HaPrP蛋白,Westernblot证实可与PrP特异性单克隆抗体反应.将纯化蛋白在体外标记生物素(Biotin-7-NHS),与纯化的scrapie 263K毒株仓鼠感染脑组织prpsc蛋白共同孵育4天后,经蛋白酶K消化,Western blot检测,证明存在一条抵抗蛋白酶K消化的、被亲和素特异性识别的条带,其分子量约为20kD.这表明HaPrpsen可以被转化为HaPrPres.实验表明,可以利用原核系统取代真核系统表达PrP,并用生物素标记取代35S标记纯化蛋白,建立一个更加安全方便的无细胞构象转化系统,用于朊病毒的研究.

关键词：PrP、原核表达、生物素标记、无细胞转化

所属期刊栏目：21

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30070038;国家自然科学基金30130070;国家高技术研究发展计划863计划2001AA215391;欧盟资助项目QLRT 2000 01441;国家科技攻关项目2003BA712A04-02

在线出版日期：2005-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：264-268