鸡贫血病毒全基因组点突变体的体外构建及其在宿主细胞MSB1的转染研究

摘要：

在已构建鸡贫血病毒（CAV）全基因组体外克隆（pCAV2.4）的基础上，设计一对特定引物，用PCR定向点突变方法扩增出含有完整的EcoRI位点的CAV全基因组（2.3kb），并克隆入pUC18载体中，获得阳性克隆，命名为pCAVE+。经酶切鉴定和序列分析EcoRI位点两侧序列，原先不完整的EcoRI位点（-GACTTC-）已被定向点突变为完整的EcoRI位点（-GAATTC-）。对重组质粒pCAVE+以EcoRI酶切回收CAV全基因组DNA，在体外连接并经纯化后，经Effectene转染易感宿主细胞MSB1。将转染细胞培养上清连续传代8次以后，出现病毒复制（MSB1细胞培养基颜色不再变黄）。取此时细胞培养液感染无CAV的1日龄SPF小鸡，14天出现典型的鸡贫血症状和胸腺萎缩、骨髓脂肪变性等病变。获得了能在体外自主复制并组装成完整CAV病毒子的感染性核酸。

关键词：鸡贫血病毒、全基因组、点突变、克隆、转染

所属期刊栏目：17

分类号：S858.31(动物医学（兽医学）)

资助基金：江苏省科技厅自然科学基金;扬州大学校科研和教改项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：136-139