伪狂犬病病毒鄂A株TK－／gG－／LacZ＋突变株的构建

摘要：

为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株，采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切，构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒pSTK1－4，进一步改造成为转移质粒pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化，然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK－／LacZ＋突变株基因组DNA共转染PK－15细胞，待完全病变后，收毒作空斑试验，PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化3次，随机挑取空斑进行PCR扩增，证实所获得的病毒为均一的无TK－／LacZ＋突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增，扩增产物经酶切分析和测序后发现：TK缺失重组病毒的TK基因缺失了205个碱基，XhoI和SalI位点消失，SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK－15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA，与含gG－LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK－15细胞，待完全病变后，在X－gal存在下筛选蓝斑，将挑取的蓝斑纯化3次后，对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增，结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段，同时又能扩增出LacZ基因，证实所得到的重组病毒为TK－／gG－／LacZ＋突变株。此双缺失突变株的构建成功，为在我国最终根除伪狂犬病提供了有用的工具。

关键词：伪狂犬病病毒、鄂A野毒株、TK－/LacZ+突变株、TK缺失突变株、TK－/gG－/LacZ+突变株

所属期刊栏目：17

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技攻关项目96－C01－04－03

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：69-74