鸡痘病毒载体启动子的优化

摘要：

要提高外源基因在鸡痘病毒(FPV)载体的表达量,必须使用强启动子来控制表达.为构建较强的启动子组合,根据痘苗病毒天然启动子P7.5的结构,人工合成4条寡核苷酸,形成一个早期启动子和一个晚期启动子,其首尾可相互连接.利用分子生物学常用实验方法把合成的启动子进行不同组合,最终形成10个较有代表性的启动子组合PS1～10.在其下游插入大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因LacZ,并进一步构建成鸡痘病毒转移载体pFBS1～10,同时以P7.5作对照构建成pFB7.5.以脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染3h～4h后的原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层.用蓝斑筛选法纯化病毒4次,最终得到稳定的重组病毒.将纯化的重组病毒感染次代CEF,分别于感染后10h、24h、36h、48h、72h收获细胞,制备提取物,检测提取物中β-半乳糖苷酶的活性.通过计算比较,筛选出其中较强的启动子组合LLEE,其表达活性约为P7.5的3.5倍,为进一步构建高效表达的鸡痘病毒通用载体打下了良好的基础.

关键词：人工合成、强启动子、β-半乳糖苷酶的活性、鸡痘病毒

所属期刊栏目：16

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划960332025;江苏省应用基础研究计划项目BJ95107;江苏省自然科学基金BK97069;江苏省教育厅资助项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：347-351