微小腺病毒载体介导的人凝血IX因子小基因的离体表达

摘要：

将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因)构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序(ITR)和包装信号ψ等顺式元件的微小腺病毒(mini-adenovirus)载体GT2073上,得到载体GTi' IX.将该载体与带有lacZ报告基因的微小腺病毒载体pRP1001分别转移入腺病毒包装细胞293Cre4中,随后再转染辅助病毒AdLC8,从而包装出微小腺病毒AdGTi' IX和AdRP1001.经超离心纯化后对两种病毒的检测结果表明,病毒颗粒浓度分别为2.4×1012/ml和2.2×1012/ml,辅助病毒所占比例均小于0.8%;用AdRP1001以感染复数(MOI)为50的比例转染3T3细胞,X-gal染色后发现细胞蓝染率在90%以上;用AdGTi'IX以MOI＝50的比例转染3T3细胞,ELISA结果表明,其瞬时表达为1.4μg/106细胞.24h.此结果显示出该载体系统在血友病B基因治疗方面有很好的应用前景,为进一步的动物试验及免疫原性研究等临床前研究奠定了良好的基础.

关键词：微小腺病毒载体、人凝血因子IX、基因转移、基因表达

所属期刊栏目：16

分类号：Q39;R554.1(人类遗传学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划Z20-02-01;国家自然科学基金39880019;上海市青年科技启明星计划98QM1409;教育部霍英东教育基金71019;高等学校博士学科点专项科研项目KE22151;高等学校博士学科点专项科研项目98024620

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：294-298