副粘病毒融合蛋白活性位点中亮氨酸基因突变分析

摘要：

为了确定副粘病毒融合蛋白(F)分子上活性位点中亮氨酸在F的细胞融合作用中的作用,弄清F融合细胞的分子机理,采用基因定点突变法创造一个酶切位点,用酶切反应初步筛选突变株,然后用DNA序列分析进一步确定,并在真核细胞内进行表达,Giemsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析(FACS)检测表达效率.结果表明,hPIV3 F第460位亮氨酸(L)和第474位异亮氨酸(I)分别突变成丙氨酸(A)(L460A和I474A)时,细胞融合功能分别只相当于野毒株的51.24%和48.73%;而第467位L和第481位L分别突变成A(L467A和L481A)时,细胞融合功能则无明显改变;当第460和467位L同时突变成A(L460A～L467A)时,细胞融合功能降低了79.13%;而第474位I和第481位L同时突变成A(I474A～L481A)时,细胞融合功能无明显改变.NDV F第481位L和第488位L分别突变成A(L481A和L488A)时,细胞融合功能分别降低了75.22%和80.04%;将二者共同突变时,则进一步降低,只有野毒株的10.13%.各突变株的表达效率没有改变.说明F分子上与HN相互作用的特异性区域中的亮氨酸在细胞融合中发挥着重要作用,即hPIV3F第460位L和第474位I,NDV第481和488位L,突变后细胞融合作用不同程度下降.

关键词：副粘病毒、融合蛋白、细胞融合、亮氨酸、基因

所属期刊栏目：16

分类号：R373;Q754(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金39570032

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：12-16