B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体构建及纯化

摘要：

目的:克隆人B型钠尿肽(脑钠素,B-type natriuretic peptide,BNP)基因,纯化其表达蛋白并制备多克隆抗体.方法:用PCR技术从正常成人心脏组织cDNA库中扩增出人BNP基因,将其克隆进pUCm-T中并测定核苷酸序列.构建大肠埃希菌分泌性表达载体pGXE4T-2/BNP,用异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,GSH-agarose亲和纯化表达蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体.结果:经PCR扩增成功获得96 bp的BNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的19%,用SDS-PAGE和Western blot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子量29 500.经亲和纯化后GST-BNP的纯度可以达到95%,500 ml菌液中得到纯化蛋白9.6 mg.多克隆抗体的效价为l:32 000.结论:BNP基因的克隆、表达和纯化成功以及多抗的获得,为建立BNP检测方法奠定了基础.

关键词：基因文库、人B型钠尿肽、克隆、分子、构建、纯化

所属期刊栏目：32

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2007-02-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：14-17