miRNA-129-5p通过调控肝素结合生长因子对非小细胞肺癌细胞增殖和迁移能力的影响机制研究

摘要：

目的 探讨miRNA-129-5p通过靶向肝素结合生长因子(HDGF)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和迁移的调控作用及其机制.方法 采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测3例NSCLC患者肿瘤组织、对应癌旁组织、支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miRNA-129-5p和HDGF mRNA表达水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测NSCLC组织、癌旁组织及16-HBE、A549和H1299细胞中HDGF蛋白表达水平.选择A549和H1299细胞为研究对象,以转染miRNA-129-5p mimics的细胞设为miRNA-129-5p mim-ics组,转染miRNA-NC的细胞设为miRNA-NC组,转染HDGF干扰RNA的细胞设为si-HDGF组,转染对照干扰RNA的细胞设为si-NC组,共转染miRNA-129-5p mimics和pcDNA3.1的细胞设为miRNA-129-5p mimics+NC组,共转染miRNA-129-5p mimics和pcDNA3.1 HDGF的细胞设为miRNA-129-5p mimics+HDGF组,正常细胞设为control组.采用qRT-PCR和Western blot分别检测各组细胞中miRNA-129-5p和HDGF的表达,双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测miRNA-129-5p与HDGF的靶向作用关系;CCK-8和Transwell分别检测各组细胞增殖和迁移能力.结果 NSCLC组织中miRNA-129-5p表达水平低于癌旁组织,HDGF mRNA及HDGF蛋白表达水平均高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05).与正常支气管上皮细胞株16-HBE相比,细胞株A549、H1299和H460中miRNA-129-5p的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P﹤0.05).A549及H1299细胞中,miRNA-129-5p mimics组细胞中HDGF蛋白表达水平明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).A549和H1299细胞中HDGF mRNA及HDGF蛋白表达水平均明显高于正常支气管上皮细胞株16-HBE,差异均有统计学意义(P﹤0.01).双荧光素酶报告基因实验结果显示,miRNA-129-5p mimics组A549、H1299细胞的HDGF-3'UTR-WT荧光素酶活性均明显低于miRNA-NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).Western blot检测发现,与si-NC组相比,转染了干扰RNA的si-HDGF组A549和H1299细胞,HDGF蛋白表达下调.作用24、48 h后,miRNA-129-5p mimics组细胞吸光度值均低于同时间miRNA-NC组,si-HDGF组细胞吸光度值均低于同时间si-NC组,miRNA-129-5p mimics+HDGF组细胞吸光度值均高于同时间miRNA-129-5p mimics+NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).A549及H1299细胞中,miRNA-129-5p mimics组细胞的迁移数目均少于control组及miRNA-NC组,si-HDGF组细胞的迁移数目均少于control组及si-NC组,miRNA-129-5p mimics+HDGF组细胞的迁移数目均多于miRNA-129-5p mimics+NC组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 miRNA-129-5p可通过下调HDGF抑制NSCLC细胞株A549和H1299的增殖和迁移.

关键词：非小细胞肺癌、miRNA-129-5p、肝素结合生长因子、细胞增殖、迁移

所属期刊栏目：17

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2019-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2211-2217