人B细胞成熟抗原的克隆、表达及纯化

摘要：

目的 构建人B细胞成熟抗原(BCMA)原核表达质粒,表达BCMA融合蛋白.方法 通过RT-PCR方法从人B淋巴瘤Raji总RNA中扩增BCMA的全长cDNA,并插入原核表达载体PGEX4T-1的BanzHI和NotI酶切位点,构建原核表达载体PGEX4T-1-BCMA,利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性.在大肠杆菌中表达BCMA融合蛋白,并经谷胱甘肽-S-转移酶(GST)亲和柱纯化.纯化后的产物经过SDS-PAGE、Western blot检测目的 蛋白的表达情况.结果 BamHI/NotI双酶切证明重组质粒中含有目的 大小的BCMA基因片段,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.将所构建的PGEX4T-1-BCMA质粒转染感受态DH5α,IPTG诱导表达后超声裂解菌体,上清经GST亲和纯化,经SDS-PAGE、抗GST和BCMA抗体Western blot分析,证实融合表达蛋白为GST-BCMA融合蛋白.结论 成功构建了BCMA原核表达载体,重组质粒能够在原核表达系统中可溶性表达GST-BCMA融合蛋白,为进一步研究BCMA的生物学功能奠定了基础.

关键词：B细胞成熟抗原、RT-PCR、原核表达

所属期刊栏目：8

分类号：R73-36+2(肿瘤学)

在线出版日期：2011-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：630-633