pIRES-PML-RARα-hIL-2重组质粒的构建和表达研究

摘要：

目的 构建PML-RARa融合基因与人白介素-2(hIL-2)基因真核双表达质粒.方法 利用RT-PCR技术从NB4细胞的RNA中扩增出PML-RARα融合点附近的部分基因片段,通过RT-PCR扩增Jurkat细胞中的hIL-2基因,并分别将两基因片段连接到pIRES质粒的多克隆位点(MCS)A和B中,构建真核双表达质粒.利用酶切和序列分析方法验证所构建质粒的正确性.将构建成功的重组质粒转染A549细胞,通过RT-PCR检测重组质粒在真核细胞中的转录情况,利用点杂交、EUSA检测目的蛋白的表达情况.结果 Nhe I/Mlu I和Sal I/Not I双酶切证明重组质粒中含有相应大小的PML-RARa基因片段及hIL-2基因,序列分析证明重组质粒中插入片段的碱基序列均完全正确.将所构建的pIRES-PML-RARα-hIL-2质粒转染A549细胞后经RT-PCR鉴定表明,插入到重组质粒中的PML-RARα和hIL-2基因能够在真核细胞中进行正常转录.经点杂交和ELISA检测显示重组质粒在真核细胞中可表达hIL-2蛋白.结论 成功构建了pIRES-PML-RARa-hlL-2质粒,该重组质粒能够在真核细胞中正常转录并表达PML-RARd和hIL-2蛋白.

关键词：PML-RARct、hIL-2、急性早幼粒细胞白血病、DNA疫苗

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分类号：R733.71(肿瘤学)

资助基金：中德生物技术合作项目CHN02/319;广东省科技计划项目2005B50301016;广州市科技攻关计划2003J1-10011,2005Z1-E4011;国务院侨办重点学科建设基金

在线出版日期：2008-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：357-361,366