甲醛固定对GFP发光特性的影响

摘要：

绿色荧光蛋白(GFP)能够作为报告分子对活体细胞中特定基因的时空表达进行实时追踪,因此广泛应用于生物学研究领域.在用GFP对细胞活动进行追踪的实验中,常有无法在取样后及时对样品进行荧光观察的情况,此时需要先将样品进行固定以便对其进行观测.然而,不恰当的细胞固定方法会导致胞内GFP荧光信号强度减弱、位置改变等后果.甲醛是最常用的细胞固定剂,也常被用于固定表达GFP蛋白的细胞样品.但对甲醛固定GFP样品的报道多是针对于真核细胞,且固定效果也存在较大差异.文章系统地探索了甲醛浓度、固定时间、固定缓冲液种类对两种细菌(E.coli及鱼腥蓝细菌Anabaena PCC7120)胞内GFP信号的影响.结果显示,较低浓度(≤1％)的甲醛处理2h后,细胞的荧光强度在1d后仍可保持80％以上,胞内荧光点无弥散现象发生.具有相近pH的几种常见缓冲液对荧光强度的影响无显著差异.随着甲醛浓度的增加、固定时间的延长、溶液pH的增加(中性至偏碱性),细胞中的荧光强度会逐渐降低.

关键词：甲醛固定、绿色荧光蛋白(GFP)、荧光保存率

所属期刊栏目：37

分类号：Q331(人工选择与自然选择)

资助基金：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目2014PY055

在线出版日期：2015-12-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：67-71