毕赤酵母甲酸脱氢酶在大肠杆菌中的融合表达及其酶学性质

摘要：

为了获得高效融合表达的甲酸脱氢酶(FDH)工程菌,用PCR方法从毕赤酵母GS115(Pichia pastoris GS115)基因组DNA中克隆FDH基因,测序发现第106位多出一个脱氧腺嘌呤核苷酸,基因定点突变后重组至胞内融合表达型T载体pET-DsbA-T,得到重组质粒pET-DsbA-FDH,转化E.coli BL21(DE3),获得胞内融合表达型FDH工程菌.SDS-PAGE分析表明,融合蛋白表观分子量约为65×103,主要以可溶形式存在于胞内.进一步研究得知,酶的最适温度为54℃,最适pH为8.5;金属离子对酶活有较强的抑制作用,EDTA能增强酶活性.

关键词：甲酸脱氢酶、克隆、定点突变、融合表达

所属期刊栏目：37

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：2013年浙江省大学生科技创新活动计划暨新苗人才计划2013R403051

在线出版日期：2015-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：30-34