埃兹蛋白(Ezrin)及其突变体的原核表达与纯化

摘要：

Thr567位点磷酸化是ezrin活化的必需条件.利用定点突变引物将T567突变为A或D,通过PCR扩增出相应的基因片段,将其通过T4连接酶连接至含His标签的原核表达载体pET-20b(+),构建了原核重组质粒pET-20b(+)-Ez WT,pET-20b(+)-EzT567A和pET-20b(+)-EzT567D.转化表达宿主大肠杆菌Rosseta后,用异丙基-β-硫代半乳糖诱导重组蛋白的表达.重组蛋白经亲和镍柱纯化以后,应用western blot鉴定纯化的融合蛋白.Ezrin野生型及其组成型激活和显性负突变质粒的成功构建及其目的蛋白His-Ez WT,His-EzT576A和His-EzT576D的成功表达纯化,为更深入地研究ezrin生物学功能奠定基础.

关键词：埃兹蛋白、野生型、组成型激活突变、显性负突变、融合蛋白表达与纯化

所属期刊栏目：34

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家973重点基础研究发展计划2011CB910701;广东省高等学校高层次人才项目[2011]431号;中央高校基本科研业务费专项资金21609317,21611430,21610101

在线出版日期：2013-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：29-34