基于氧化应激探索木犀草素对缺氧-复氧损害的H9c2心肌细胞的保护作用

摘要：

目的 基于氧化应激探索木犀草素对缺氧-复氧损害的H9c2心肌细胞的保护作用.方法 在体外木犀草素培养后,再缺氧-复氧培养H9c2心肌细胞模拟缺血再灌注为实验组,以正常培养细胞为对照组,以仅缺氧-复氧培养细胞为缺氧-复氧组.观察细胞形态;流式检测细胞凋亡情况;生化检测细胞丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、谷胱甘肽(GSH)含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶(γ-GCS)、血红素加氧酶(HO-1)、NAD(P)H醌氧化还原酶(NQO1)mRNA表达;蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白含量.结果 缺氧-复氧诱导H9c2细胞凋亡[(8.14±1.13)比(72.37±6.98),t=15.733,P=0.000]及促进Bax蛋白表达[(0.38±0.04)比(1.01±0.09),t=11.079,P=0.000],抑制Bcl-2蛋白表达[(0.83±0.06)比0.43±0.04,t=9.608,P=0.001],木犀草素可浓度依赖的抑制细胞凋亡[(72.37±6.98)比(41.38±4.32)、(29.67±5.67),t1=6.539,P=0.003;t2=8.224,P=0.001]及Bax蛋白表达[(1.01±0.09)比(0.71±0.06)、(0.45±0.03),t1=4.979,P=0.008;t2=10.224,P=0.001],增加Bcl-2蛋白表达[(0.43±0.04)比(0.63±0.04)、(0.74±0.05),t1=6.124,P=0.004;t2=8.386,P=0.001];在氧化应激层面,木犀草素可降低由缺氧-复氧引起的MDA、8-OHdG升高[MDA:(1.73±0.12)nmol/mg比(1.12±0.11)nmol/mg、(0.82±0.06)nmol/mg、(0.63±0.04)nmol/mg,t1=5.879,P=0.004;t2=11.748,P=0.000;t3=15.062,P=0.000;8-OHdG:(316.37±21.53)ng/L比(253.26±19.33)ng/L、(211.45±20.98)ng/L、(189.15±18.01)ng/L,t1=3.778,P=0.019;t2=6.054,P=0.004;t3=7.850,P=0.001],升高由缺氧-复氧引起的GSH含量[(88.59±7.99)nmol/mg比(142.19±12.31)nmol/mg、(178.67±16.78)nmol/mg,t1=6.326,P=0.003;t2=8.395,P=0.001]以及γ-GCS、HO-1、NQO1 mRNA的表达下调[γ-GCS:(0.67±0.07)比(0.85±0.07)、(1.02±0.11),t1=3.149,P=0.035;t2=4.649,P=0.010;HO-1:(0.41±0.03)比(0.63±0.06)、(0.82±0.07)、(0.95±0.10),t1=5.945,P=0.004;t2=9.624,P=0.001;t3=9.126,P=0.001;NQO1:(0.51±0.04)比(0.73±0.06)、(0.82±0.08)、(1.15±0.12),t1=5.284,P=0.006;t2=6.003,P=0.004;t3=8.764,P=0.001];进一步发现木犀草素可导致Nrf2蛋白的进一步升高[(0.62±0.05)比(0.85±0.07)、(0.97±0.08),t1=4.631,P=0.010;t2=6.426,P=0.003]以及Keap1进一步下调[(0.72±0.04)比(0.28±0.02)、(0.15±0.01),t1=17.041,P=0.000;t2=23.945,P=0.000].结论 木犀草素可作用于Nrf2-(抗氧化响应元件)ARE通路,激活该信号通路后,可增加H9c2细胞中抗氧自由基酶的表达量,并降低由缺氧-复氧培养所引起的H9c2细胞的氧化应激水平,抑制心肌细胞凋亡,保护心肌细胞免受缺氧-复氧损伤.

关键词：心肌再灌注损伤/病因学、木犀草素、氧化性应激、肌细胞、心脏、H9c2细胞株

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在线出版日期：2020-06-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1084-1089,前插2