异丙安替比林通过抑制蛋白激酶B通路诱导人肾癌细胞凋亡和自噬

摘要：

目的 探究异丙安替比林( Propyphenazone)对人肾癌细胞Caki-1 增殖抑制和凋亡的影响及其分子机制.方法 使用MTT(四甲基偶氮唑盐)法和克隆形成抑制实验检测异丙安替比林在不同时间和浓度下对Caki-1细胞增殖能力的影响;An-nexin V-FITC/PI双染色检测对Caki-1细胞凋亡的影响;Hoechst 33342染色法检测Caki-1细胞染色质固缩状态;蛋白质印迹法(Western Blot)检测Caki-1细胞的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶AKT(蛋白激酶B)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶p-AKT以及DNA修复酶PARP蛋白表达变化;激光共聚焦显微镜检测LC3蛋白在细胞中的点状聚集.结果 MTT实验结果表明异丙安替比林可抑制人肾癌细胞Caki-1的增殖( P＜0. 05),同时,异丙安替比林分别处理24 h、48 h、72 h后,所对应的半抑制浓度( IC50 )分别为105 μM、83 μM、56 μM;同时,克隆形成抑制实验表明20 μM和40 μM的异丙安替比林处理Caki-1细胞后,克隆形成率分别降为38% (P＜0. 05)和20% ( P＜0. 01);流式结果表明,当使用0 μM、40 μM、80 μM和100 μM 的异丙安替林处理Caki-1细胞后,细胞凋亡率分别为7. 4% 、13. 5% 、34. 5%和50. 9% ;Western Blot结果表明,随着异丙安替比林浓度的增加, p-AKT蛋白表达降低,并伴随DNA修复酶PARP失活.免疫荧光实验结果表明异丙安替比林可能诱导细胞发生自噬.结论异丙安替比林显著抑制人肾癌Caki-1细胞增殖,并通过抑制AKT通路诱导肾癌细胞发生凋亡和自噬.

关键词：肾肿瘤、异丙安替比林、Caki-1细胞、细胞凋亡、自噬、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶、流式细胞术

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资助基金：广东省科技计划项目20130313c

在线出版日期：2019-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1501-1504,后插3