长链非编码 RNA Linc00461干扰慢病毒的构建与鉴定

摘要：

目的：制备 shRNA 干扰人长链非编码 RNA Linc00461的慢病毒载体（shRNA-Linc00461），为进一步深入研究长链非编码 RNA 的功能奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计，根据小干扰 RNA 的设计原则，选取三对针对Linc00461特异性干扰引物送公司合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒 pSIH1-H1，形成 pSIH1-H1-shRNA-Linc00461质粒。用 PCR 及测序对其进行鉴定，之后与慢病毒包装质粒混匀，由脂质体转染至 HEK293T 细胞进行包装，产生慢病毒 shR-NA-Linc00461，收集上清液使其感染乳腺癌 MDA-MB-231细胞，通过 RT-PCR 鉴定重组慢病毒干扰效果。并选取干扰效果最好的 Linc00461感染 MDA-MB-231细胞，运用 MTT 和流式细胞术检测细胞增殖和周期的改变。结果 SIH1-H1-shRNA Linc00461质粒经 PCR 验证和测序后，证实其构建成功。shRNA-Linc00461在 HEK293T 细胞中重组成慢病毒，并成功感染MDA-MB-231，感染效率约为70％。shRNA-Linc00461感染乳腺癌 MDA-MB-231细胞后 Linc00461的表达下调65．32％；感染shRNA-Linc00461第3天 MTT 结果显示：实验组吸光度值（0．232±0．032）明显低于实验对照组（0．398±0．037）。流式结果提示实验组 G2M期细胞（47．55±5．063）％高于实验对照组（8．876±3．565）％。结论成功构建了 shRNA-Linc00461慢病毒载体，并能有效抑制 Linc00461表达，为深入研究人 Linc00461基因功能奠定了基础。

关键词：RNA、小分子干扰、乳腺肿瘤、慢病毒属

所属期刊栏目：20

分类号：U45;TP3

资助基金：国家自然科学基金81172017；重庆市教委课题KJ1500202

在线出版日期：2016-08-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1295-1299