HCMV pp65 DNA疫苗的纯化与检定

摘要：

目的 研究HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)的纯化工艺,并建立质控标准.方法 对工程菌(DH5α/peDNA3.1-pp65)的高效发酵菌体采用碱裂解法进行质粒初提;三步柱层析(依次为分子筛层析、亲和层析、阴离子层析)对质粒进行纯化,检测质粒含量、超螺旋比例、内毒素等,最后对终产品质粒溶液进行全面质量检定.结果 质粒初提液通过分子筛层析后,去除了大量RNA、宿主DNA、内毒素等,再经亲和柱纯化后获得了高比例的超螺旋质粒DNA,达95%,经阴离子柱层析有效去除内毒素,质粒得率为0.8～0.95 mg/g菌,质粒总回收率达72.7%.三批终产品全面质量检定均符合规定.结论 建立了稳定的HCMV pp65 DNA疫苗(pcDNA3.1-pp65)纯化工艺及质量控制标准,为进一步研究奠定了重要基础.

关键词：HCMV、pp65、DNA疫苗、质粒、纯化

所属期刊栏目：31

分类号：R284.2;Q5;O657.7

资助基金：安徽省教育厅自然科学研究项目;安徽省科技攻关计划;国家自然科学基金

在线出版日期：2010-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：201-204