犬肺表面活性蛋白A的克隆及其在昆虫杆状病毒系统的表达

摘要：

利用RT-PCR方法扩增犬肺表面活性蛋白A(canine lung surfactant protein A,cSP-A)基因,将其连接至pMD18-T载体,经测序正确后,使用DNAMAN软件比对不同种属SP-A基因序列;将cSP-A基因片段经双酶切后连接至pFastbacl载体得到pFastbacl-cSP-A;再将其转化至DH10Bac感受态细胞,获得重组Bacmid质粒,然 后转染sf9细胞得到P1代重组杆状病毒PlrBv-cSP-A4,Pl代病毒连续扩增3代后,取P4 rBv-cSP-A感染sf9细胞表达cSP-A重组蛋白,利用蛋白免疫印迹和间接免疫荧光试验鉴定表达产物.结果显示cSP-A基因大小为699bp;不同种属间SP-A的C末端碳水化合物识别结构域的同源性为49.1％～95.5％;经Western Blot和IFA鉴定,重组cSP-A蛋白在细胞内表达未分泌到胞外,分子量大小约为31.84 kDa.

关键词：犬、肺表面活性蛋白A、克隆、昆虫杆状病毒表达系统、表达

所属期刊栏目：49

分类号：S858.292.53(动物医学（兽医学）)

资助基金：安徽农业大学研究生创新项目;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：449-453