骨髓来源巨噬细胞中有效地敲除floxed基因的新方案

摘要：

探索了在骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中有效地敲除oxed基因,更好地研究基因敲除引起的表型的新方案.由于传统方法往往导致floxed基因不能被LysM-cre酶高效地敲除,阻碍了BMDMs在一些遗传学方面的应用.通过调整培养基的更换时间,及时补充新鲜的M-CSF,使用胰酶消化分盘,有效地提高了细胞得率,并增强了基因在BMDM中的敲除效率.与传统方法相比,新方案将BMDMs得率增加了1倍,每只小鼠能获得接近5×107个BMDMs.新方案也显著性地提高了巨噬细胞中mTOR基因的敲除效率,从36.77％±5.07％提高到了76.9％±7.83％.新方案获得的LysM-cre/mTORfl/flBMDMs与mTORfl/flBMDMs相比,在应答LPS刺激方面出现了显著的表型差异,表达了更多的细胞因子IL-6和IL-12.在小鼠来源受限和需要提升巨噬细胞中特定基因敲除效率的情况下,本方案具有极为突出的优势,用少量的小鼠获得可靠的实验数据,也符合动物实验的“3R”原则.

关键词：髓源巨噬细胞、LysM-cre、floxed基因、基因敲除

所属期刊栏目：42

分类号：Q813(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金项目31070779资助.

在线出版日期：2016-01-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：898-903