柞蚕真菌蛋白酶抑制剂基因CP8的克隆与表达分析

摘要：

蛋白酶抑制剂在昆虫免疫中发挥着重要的作用.首次克隆获得了一个柞蚕真菌蛋白酶抑制剂基因ApCP8的开放阅读框(ORF)序列.该基因的ORF序列全长318 bp,编码了一个由106个氨基酸组成的蛋白(包括19个氨基酸的信号肽).预测蛋白的等电点和分子量大小分别为9.05和11.3 kD.序列分析和进化树构建结果表明,ApCP8与已知的几种昆虫相应蛋白具有很高的同源性,且与印度柞蚕的CP8聚在同一进化分支上.实时荧光定量PCR (RT-qPCR)结果表明,ApCP8主要在柞蚕脂肪体中高表达;且ApCP8在被白僵菌诱导的初期高表达,推测其可能参与了柞蚕抗真菌的免疫反应.同时,利用pET-32a(+)载体对ApCP8进行了原核表达,并对重组表达蛋白进行了纯化和抗体制备.本研究将为进一步探索ApCP8的抗真菌功能奠定前期基础.

关键词：柞蚕、CP8基因、克隆、原核表达、RT-qPCR

所属期刊栏目：42

分类号：S885.1(蚕桑)

资助基金：国家农业产业技术体系CARS-22-SYZ10和国家自然科学基金31402018共同资助.

在线出版日期：2015-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：780-785