山羊α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体的构建及核供体细胞的转染

摘要：

为了构建α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体及提供山羊乳腺生物反应器α-乳清蛋白核移植供体细胞,提取乳腺组织中的总RNA,采用RT- PCR技术获得α-乳清蛋白基因cDNA,测序酶切后连接乳腺特异性表达载体pBC Ⅰ - Neo,并对重组载体进行酶切测序鉴定；取重组正确的载体酶切线性化后利用脂质体介导转染至山羊胎儿成纤维细胞,通过G418筛选培养转染了α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体的山羊胎儿成纤维细胞.结果显示:经过RT-PCR特异性扩增克隆出α-乳清蛋白基因；克隆的基因碱基组成序列经测序与预期完全一致,α-乳清蛋白基因片段正向插入乳腺特异性表达载体；重组载体在山羊胎儿成纤维细胞中稳定转染,转入α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体的山羊胎儿成纤维细胞生长迅速,仍保持原有的细胞生长形态.成功构建了α-乳清蛋白乳腺特异性表达载体,获得稳定转染的山羊胎儿成纤维细胞可用于核移植.

关键词：山羊、α-乳清蛋白基因、乳腺特异性表达载体、胎儿成纤维细胞、转染

所属期刊栏目：39

分类号：S827(家畜)

资助基金：转基因生物新品种培育重大专项2009ZX08006-007B

在线出版日期：2012-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：735-738