纳豆激酶基因的克隆和高效表达

摘要：

为了克隆纳豆激酶(Nattokinase,NK)基因,实现纳豆激酶在大肠杆菌中的表达,并对其表达条件进行研究,首先以从枯草芽孢杆菌中提取的基因组DNA为模板,通过PCR扩增包括信号肽、前导肽、成熟肽序列的前纳豆激酶原基因,将其克隆到载体pET28a中,构建重组质粒pET28a-NK,成功转化大肠杆菌BL21(DE3);然后优化影响该基因表达的温度、时间和IPTG添加量等因素.结果表明,重组菌株BL21(DE3)-NK在20℃下培养、IPTG添加量为0.4mmol·L-1、培养20h时表达产物的纤溶活性最大,可达到81.73 U·mL-1,SDS-PAGE检测观察到l条38 kDa的蛋白条带,与预期相符.

关键词：纳豆激酶、枯草芽孢杆菌、基因克隆、表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：安徽省教育厅自然科学研究重点项目KJ2009A107

在线出版日期：2012-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：556-559