转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用
根据苏云金杆菌营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa序列设计全基因扩增引物,并在引物两端添加合适的酶切位点进行PCR扩增,纯化的PCR产物和载体pbarGPE1分别经Xho I和EcoR I双酶切、连接,构建真菌表达载体pbarGPE1-vip3Aa.将构建好的质粒经Sea I酶切线性化后,利用芽生孢子转化法转入昆虫病原真菌球孢白僵菌Bb13菌株内,得到白僵菌工程菌株Bb13V.RT-PCR结果证明Vip3Aa在工程菌株中已得到成功转录.在室内恒温25℃条件下,用喂食、喷雾以及两者相结合的方法,分别测定1×105、1×106、1×107、1×108和2× 108孢子·mL-1 5个不同孢子浓度下原始菌株和工程菌株对二龄马尾松毛虫的毒力.结果表明,在前4种不同浓度的处理条件下,采取3种不同的处理方式,工程菌株均比喷雾处理的原始菌株致死率提高30％以上；喷雾处理的毒力提高33.6～62.1倍；喂食处理的致死率均高于喷雾处理.在1×108孢子·mL-1浓度下,喂食处理的致死率显著高于喷雾处理,致死中时缩短6.89 d.因此,Vip3Aa基因在转入白僵菌后得到了表达,从而赋予白僵菌可观的胃毒作用,使得工程菌对松毛虫的毒力明显增强.
球孢白僵菌、苏云金杆菌、Vip3Aa基因、载体构建、芽生孢子转化、基因工程
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S476.12(各种防治方法)
2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
736-741
