泽泻ISSR反应体系的建立与优化

摘要：

目的:建立并优化泽泻反应体系和扩增程序,筛选出多态性、重复性较好的ISSR引物,为泽泻种源鉴别以及指纹图谱的构建提供理论基础.方法:利用单因素试验法,对Mg2+浓度、dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度及模板DNA含量这5个PCR反应体系主要成分以及退火温度进行筛选,并利用建立优化的反应体系和扩增程序对以往泽泻文献报道的ISSR引物进行筛选.结果:建立了最佳PCR反应体系:20μL的反应液中含2.0mmol·L-1Mg2+,0.4mmol·L-1dNTPs,1.0 U TaqDNA聚合酶,0.4mol·L-1引物,10ng模板DNA,2μL 10xBuffer,13.1μL dd H2O.反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s.58.9℃退火45s,72℃延伸90s,40个循环;72℃延伸7min,4℃保存.结论:利用优化的泽泻的反应体系,筛选出15条多态性较好的引物,并对泽泻的21个种源进行ISSR扩增,扩增出的条带清晰、多态性较高,证实了该体系具有较高稳定性、重现性和适用性.此体系也为泽泻种源间的遗传多样性研究以及ISSR分子标记奠定了基础.

关键词：泽泻、ISSR、反应体系、优化

所属期刊栏目：23

分类号：R282.7(中药学)

资助基金：福建省科技创新平台项目2008y2001

在线出版日期：2017-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：23-26,100