pGEX－4T－2－A表达系统的构建及其融合蛋白GST－PlaA的表达优化

摘要：

构建 pGEX－4T－2－A表达质粒来获得融合蛋白 GST－PlaA．PCR 扩增粘质沙雷氏菌 PL－06磷脂酶 A1基因PlaA,定向克隆到 pGEX－4T－2载体上．重组质粒转化至大肠杆菌JM109菌株中,进行阳性克隆的筛选并测序．将测序正确的质粒转化到表达菌株 BL21(DE3)PLysS中,经 IPTG诱导并进行 SDS－PAGE 分析,验证融合蛋白 GST－PlaA的表达,同时优化培养条件．pGEX－4T－2－A表达质粒构建成功,其融合蛋白 GST－PlaA以包涵体形式表达．在 OD值为0．8时加入终浓度为0．5 mM的 IPTG,37℃诱导8 h时,融合蛋白 GST－PlaA表达量最高．为磷脂酶 A1蛋白的纯化与功能研究奠定了基础．

关键词：磷脂酶 A1、融合蛋白、SDS-PAGE、表达条件

所属期刊栏目：31

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31471615,31501465

在线出版日期：2016-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：11-15